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荧光增白剂28的使用范围及其优点:

荧光增白剂28(Fluorescent Brightener 28)核酸探针传统的标记物是用放射性同位素,多用32PdNTP、3HdNTP、35SdNTP等。用放射性同位素标记核酸有以下优点:

(1) 灵敏性高:一般可达到0.5~5pg或更低浓度核酸的检测水平,可以检测较少量或拷贝数少的基因组(可延长曝光时间或增敏屏增敏)。

(2) 荧光增白剂28(Fluorescent Brightener 28)特异性高:用放射自显影法,样品中存在的无关核酸或非核酸成分不会干扰检测结果,准确率高,假阳性率低。

(3) 方法简便。所以,放射性同位素标记核酸探针在一些有条件的单位,作为主要的标记方法仍在使用。

RNA定量方法与DNA定量相似。RNA在260nm波长处有*的吸收峰。因此,可以用260nm波长分光测定RNA浓度,OD值为1相当于大约40μg/ml的单链RNA。如用1cm光径,用 ddH2O稀释DNA样品n倍并以ddH2O为空白对照,根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度:

RNA(mg/ml)=40×OD260读数×稀释倍数(n)/1000

RNA纯品的OD260/OD280的比值为2.0,故根据OD260/OD280的比值可以估计RNA的纯度。若比值较低,说明有残余蛋白质存在;比值太高,则提示RNA有降解。

荧光增白剂28注意事项:

1. 样品量和Trizol的加入量一定要按步骤(1)的比例,不能随意增加样品量或减少Trizol量,否则会使内源性RNase的抑制不完全,导致RNA降解。

2. 实验过程******严格防止RNsae的污染。

3. 荧光增白剂28(Fluorescent Brightener 28)常温运输,室温干燥保存,有效期一年。

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